BRAF^V600E突变位于人染色体7q34, 是第15外显子上第1 799位核苷酸上的胸腺嘧啶(T)转换为腺嘌呤(A), 导致蛋白质产物中第600位的缬氨酸(V)转换为谷氨酸(E)所致。BRAF^V600E突变常见于恶性黑色素瘤、甲状腺癌、结肠癌及卵巢癌等。其在国内甲状腺癌中的突变情况研究并不多, 本研究分析了110例PTC的BRAF^V600E突变情况, 现将结果报告如下。

1.   材料与方法

1.1   实验对象及方法

天津医科大学附属肿瘤医院目前已开设基因诊断室, 本科临床考虑甲状腺癌的患者术中常规取部分新鲜肿瘤组织, 基因诊断室检测BRAF^V600E突变情况。本研究选取2011年3月至2011年8月所收治的临床考虑甲状腺癌的患者112例, 其中3 0例患者同时取部分正常甲状腺组织进行检测对照。所有病例均经病理科确诊。HT以甲状腺过氧化物酶抗体或甲状腺球蛋白抗体升高为标准。合并结节性甲状腺肿参照术前彩超或术后病理结果确认。

1.2   统计学方法

通过SPSS17.0软件进行统计分析, 分类变量采用χ²检验, 连续变量采用t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2.   结果

BRAF^V600E突变检测共计112例, 其中2例最终病理结果为良性, 110例病理为PTC。2例良性患者均为野生型, 110例PTC中突变型69例, 野生型41例, 突变率62.7%。其中30例患者正常甲状腺组织同时行BRAF^V600E突变检测, 结果均为野生型。

BRAF^V600E突变与性别、腺外侵犯、癌灶大小、多灶性、淋巴结转移、分期之间的关系经χ²检验差异无统计学意义(表 1); t检验未发现突变型组与野生型组年龄的平均值存在明显差异(表 1); 年龄以45岁为界分组后, 经χ²检验突变率差异无统计学意义; 年龄按青、中、老年分组后经χ²检验差异有统计学意义(表 2)。

表  1  BRAF^V600E突变与PTC患者临床病理参数间的关系  例（%）

Table  1.  Correlation between BRAF^V600E mutation and clinicopathologic parameters in PTC

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表  2  年龄对BRAF^V600E突变的影响  例（%）

Table  2.  BRAF^V600E mutation in ≤30, 30~60, and≥60 age groups

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合并桥本氏甲状腺炎(HT)的PTC患者40例, 突变率42.5%(17例), 未合并HT的PTC患者70例, 突变率74.3%(52例), 差异有统计学意义(表 3)。合并结节性甲状腺肿的PTC患者61例, 突变率72.1%(44例), 未合并结节性甲状腺肿的PTC患者49例, 突变率51.0%(25例), 差异有统计学意义(表 4)。

表  3  合并桥本氏甲状腺炎与BRAF^V600E突变的相关性  例（%）

Table  3.  BRAF^V600E mutation in PTC coexisting with Hashimoto's thyroiditis

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表  4  合并结节性甲状腺肿与BRAF^V600E突变的相关性  例（%）

Table  4.  BRAF^V600E mutation in PTC coexisting with nodulor goiter

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3.   讨论

甲状腺癌常见的组织学类型有乳头状癌(PTC)、滤泡癌(FTC)、髓样癌(MTC)、未分化癌(ATC)。BRAF^V600E突变仅存在于PTC和ATC中, 而不存在于FTC、MTC、甲状腺良性疾病及正常甲状腺组织中。本研究检测结果也显示2例良性病变及30例正常甲状腺组织均为野生型。BRAF^V600E突变在ATC中检出率较低, 在PTC的检出率文献报道差异很大, 西方国家PTC中BRAF^V600E突变的检出率较韩国低^[1-3]。本研究BRAF^V600E突变在PTC中的检出率为62.7%, 较西方国家报道偏高, 而低于多数韩国文献报道, 考虑BRAF^V600E突变可能存在种族性差异。突变的检出率也可能受样本选取的影响, 如样本的甲状腺癌组织学亚型、年龄的构成比不同等, 另外, 突变的检测方法等因素也有可能影响到检出率。

目前国外有不少关于BRAF^V600E突变与甲状腺癌临床病理学参数相关性的研究。多数研究显示经典型PTC的突变率明显高于滤泡亚型的PTC^[3-4]。但对于BRAF^V600E突变可否作为指导预后不良的指标争议较大。多数文献统计可发现其中一项或几项临床病理参数与BRAF^V600E突变有相关性。如Xing等⁵的一项多中心研究资料显示腺外侵犯、颈淋巴结转移和甲状腺癌已处于进展期(Ⅲ~Ⅳ期), 均与PTC的BRAF^V600E突变有显著相关性。但也有研究认为突变与各参数不存在相关性^[6]。本研究虽然显示BRAF^V600E突变与性别、腺外侵犯、癌灶大小、多灶性、淋巴结转移、分期相关性差异无统计学意义, 但可以发现突变组的腺外侵犯比例、多灶性比例以及处于Ⅲ~Ⅳ期的比例均高于野生型组, 或许通过增加样本量可以发现之间的相关性。

本研究t检验统计中未发现突变型组与野生型组年龄的平均值存在明显差异。以45岁分组, χ²检验后两组也未见明显差异, 但按青年(≤30岁)、中年(30~60岁)、老年(≥60岁)分组, 突变率分别为25.0%、62.8%、81.2%, 差异有统计学意义。Nikoforova等^[7]研究55例切尔诺贝利核事故后的PTC患者和82例散发型PTC患者, 发现核事故导致PTC中BRAF^V600E突变的发生率为4%, 散发型PTC中BRAF^V600E突变的发生率为37%, 而RET/PTC重排的发生率分别为58%和20%。一方面说明核辐射主要导致RET/PTC重排率的增加, 而BRAF^V600E可能是一种对放射不敏感的基因。另一方面对于核事故后PTC BRAF^V600E突变率低于散发PTC患者的现象, 有学者认为是由于年龄构成比与突变有相关性, 儿童及青少年突变率低, 而核辐射导致的PTC患者大多为儿童的缘故^[8]。另外, 最新研究也表明随年龄的增加BRAF^V600E突变率明显增加^[6]。结合本研究的统计结果认为BRAF^V600E突变与年龄有一定的相关性, 此突变的发生可能是一个时间累积的过程, 儿童及青年的突变率低, 而老年人突变率高。

PTC常伴发甲状腺良性疾病同时发生, 本研究也分别统计了合并HT和合并结节性甲状腺肿的PTC患者的BRAF^V600E突变率, 发现伴发HT的患者突变率低(P=0.001), 而伴发结节性甲状腺肿的患者突变率高(P=0.023)。HT合并甲状腺癌的病例并不少见, Larson等^[9]的研究表明, HT患者甲状腺癌的发病率是普通人的3倍。部分文献认为合并HT的甲状腺癌淋巴结转移率低, 预后相对好, 有人认为是因为自身免疫性可杀伤杀死癌细胞, 还有人认为癌旁的甲状腺炎淋巴细胞浸润以及血浆中淋巴细胞的渗出, 限制和减少了癌细胞的扩散。Kim等^[10]统计了101例患者显示合并HT的甲状腺癌BRAF^V600E突变率低, 与本研究统计结果一致。这一现象也提示合并HT的PTC预后较好可能与BRAF^V600E突变率低有关。虽然本研究显示合并结节性甲状腺肿的PTC患者BRAF^V600E突变率高, 但国内外文献鲜见其它报道, 尚需更进一步的大样本统计资料加以证实。而合并此两种良性甲状腺疾病的PTC的BRAF^V600E突变率与单纯PTC突变率的差别的原因也有待于从分子水平上进一步研究。