摘要:
目的 应用TPX2-siRNA转染Hela细胞, 探讨TPX2基因沉默后对Hela细胞增殖和侵袭力及周期分布的影响。 方法 合成TPX2特异性的siRNA 4对, 随机siRNA阴性对照1对。Lipofectamine 2000介导siRNA转染Hela细胞株。RT-PCR检测转染前后mRNA表达的变化, Western blot检测转染前后蛋白表达的变化, MTT、流式细胞术(FCM)、Transwell小室和Matrigel基质侵袭实验观察细胞增殖、周期、及侵袭能力的变化。 结果 在600μL转染体积中, 在siRNA浓度为20μmoL/L时, siRNA和Lipoectamine2000以2.5:2比例搭配时, 转染效率最高, 24h为(98.33±1.53)%。TPX2mRNA沉默效果尤以TPX2-siRNA4最强达(82.5±0.43)%, 其蛋白表达水平明显降低, 抑制率达(63.4±1.05)%。TPX2-siRNA4转染组发生了明显的细胞周期S期停顿现象, 细胞增殖受到显著抑制。TPX2-siRNA4转染组穿膜细胞为13.33±1.53显著低于空白对照组54.33±2.52和阴性对照组53.00±4.00(P < 0.05)。 结论 siRNA干扰TPX2后能抑制Hela细胞增殖和侵袭, 影响其周期分布, 因此TPX2可以作为人宫颈腺癌基因治疗的候选靶点。